Molekulinė diagnostika: PGR realiuoju laiku
Šiuo metu atliekama molekulinė diagnostikaSukurtas polimerazės grandininės reakcijos mechanizmas (PGR), kuris paskatino daugybę ligų diagnostikos metodų, pagrįstų genetinės medžiagos apibrėžimu. Realaus laiko PGR metodu naudojamas ligos sukėlėjo geno (ypač nukleino rūgšties) fragmentas, kurio kitiems žmonėms nerasta.
PGR principas yra daugybatam tikru DNR fragmentu patogeno milijonus kartų, naudojant DNR polimerazę specialiu aparatu, vadinamu terminiu ciklu, kuris suteikia tam tikros programos ciklišką temperatūros režimo pasikartojimą.
PCR diagnozė leidžia pakartoti serijąstiprinimas, išlaikant fermento aktyvumą. Kai stiprinimas yra nekliudomas, per vieną ciklą tam tikros DNR poros kopijų skaičius dvigubina po trisdešimt ciklų - šimtą dešimt kartų. Štai kodėl PCR naudojamas diagnozei nustatyti pakankamai mažus patogenus, kurių aptikimas neįmanomas be šio.
Reikėtų pažymėti, kad RNR negali būti matricarealaus laiko PGR. Todėl, norint aptikti virusinę RNR, prieš sustiprinimą reikia gauti DNR, atitinkantį jo fragmentą. Polimerazės grandininė reakcija leidžia išmatuoti patologo DNR ir RNR. Tokiu būdu gauta informacija naudojama stebint gydymo efektyvumą, taip pat įvertinti klinikinę prognozę.
Be to, realaus laiko PGR nereikiapapildomi veiksmai, susiję su tiriamos DNR ar amplikonų iššifravimu, kurie yra kliūtis teisingam diagnozavimui ir sukelia klaidingus rezultatus. Šis metodas leidžia mums nenaudoti elektroforezės etapo, dėl kurio sumažėja polimerazės grandininės reakcijos produktų infekcijos pavojus. Be to, dėl to, kad manipuliacijų su agentu skaičius sumažėjo, sumažina tyrimo metu, jis supaprastina procesą, sumažina klaidų tikimybę. PGR taip pat leidžia jums nurodyti pradinį kopijų skaičių patogeno DNR klinikinio tyrimo padėti nustatyti laikotarpius paūmėjimų ir laiku imtis priemonių, kad būtų išgydyti pacientą.
Iki šiol yra daugybėstiprinimo fiksavimo metodai realiuoju laiku. Dažniausiai naudojami įvairūs metodai, naudojantys radiocheminius koreliuotiems zondus, kurių spinduliuotės intensyvumas skiriasi nuo amplikono kaupimosi ir įrašomas realiuoju laiku naudojant specialų įrenginį, vadinamą stiprintuvu su optiniu moduliu. Tai užtikrina aukštą analizės jautrumo lygį. Tokiu atveju PGR produktas gali būti aptiktas kartu su didžiuliu kiekiu šalutinių produktų, o naudojant elektroforezę dažnai nepastebima.
Realaus laiko PGRteigiami, kontroliniai ir neigiami mėginiai. Taigi, teigiami ir neigiami mėginiai tyrimo metu analizuojami kaip atskiri mėginiai, po to kontrolinis mėginys pridedamas prie kiekvieno tokio mėginio ir eina per visus analizės etapus.
Iki šiol yra daugybėpolimerazės grandininės reakcijos prietaisai. Tai apima "Bio-Rad", "Applied Biosystems", "Cepheid" arba "Roche". Kiekvienas iš jų turi nuopelnus ir trūkumus
Reikėtų pažymėti, kad PGR yra diagnostikos metodas,Jis naudojamas dideliuose mokslo, mokslinių tyrimų ir diagnostikos centruose visame pasaulyje, nes tai leidžia greitai išaiškinti rezultatus.
